Grazie per la risposta. Ho provato, ma non ha funzionato. 
Ho fatto una prova ai minimi termini, se apro solo l'app senza aprire il foglio, poi riesco a chiudere. Se apro anche un foglio, non riesco a chiudere. 
Ho provato a cambiare file e a salvarlo con nome in xlsm (da xls), ma niente! Il codice sottostante è con l'attivazione del foglio “oTempi”, se commento tutto ciò che riguarda “oTempi” funziona :-(
Forse è un problema di installazione VB.net? è la prima volta che lavoro con Excel in VB.net…
Option Strict Off
Option Explicit On
Imports Excel = Microsoft.Office.Interop.Excel
Imports Microsoft.VisualBasic
Imports System
Imports System.Drawing
Imports System.Windows.Forms
Imports System.Text
Imports System.Runtime.InteropServices
Imports System.IO
Partial Friend Class Form1
     Private Sub Command1_Click(sender As Object, e As EventArgs) Handles Command1.Click
      Dim percorso As String = Text1.Text
      Dim oExc As New Excel.Application()
      Dim oTempi As Excel.Workbook = oExc.Workbooks.Open(percorso)
       oTempi.Close(False)
      oExc.Quit()
      releaseObject(oTempi)
      releaseObject(oExc)
      Image1.Visible = False
      Command3_Click(Command3, New EventArgs())
  End Sub
  Private Sub releaseObject(ByVal obj As Object)
      Try
          System.Runtime.InteropServices.Marshal.ReleaseComObject(obj)
          obj = Nothing
      Catch ex As Exception
          obj = Nothing
      Finally
          GC.Collect()
      End Try
  End Sub
  End Class